1 奠定分子生物学重发现
1)细胞学说证明动植物细胞组成
2)孟德尔遗传学规律先形状产生认识
3)摩尔根基学说进步性状基相偶联成现代遗传学
4)WatsonCrick提出脱氧核糖核苷酸双螺旋模型充分揭示遗传信息传递规律铺道路
5)蛋白质方面Sumner证实酶蛋白质Sanger利纸电泳色谱技术开创蛋白质序列分析先河
2 染色体染色质间区?什染色体?什染色质?
染色质染色体组成成分物质细胞周期功阶段中呈现构象染色质指间期细胞核DNA组蛋白非组蛋白少量RNA组成线性复合结构间期细胞遗传物质存形式染色体指细胞丝分裂减数分裂特定阶段染色质细丝高度螺旋化形成较粗柱状杆状等形状染色体
3生物进化程中谈谓C值矛盾?形成?什会C值矛盾?C值矛盾解答?
C值:种生物单倍体基组DNA总量称C值
C值矛盾:指C值种系进化复杂程度样某低等生物具较C值
C值矛盾形成:真核生物基组特点含量重复序列许DNA序列编码蛋白质没生理功功DNA序列编码蛋白质非功DNA隔开样容易造成C值矛盾
4DNARNA全名?DNA组成单位什?核苷酸什呢?分层层解
DNA称脱氧核糖核酸英文全称:deoxyribonucleic acid
RNA称核糖核酸英文全称:Ribonucleic Acid
DNA组成单位:种高分子化合物基单位脱氧核苷酸脱氧核苷酸磷酸基团脱氧核糖含氮碱基组成中含氮碱基包括腺嘌呤(A)鸟嘌呤(G)胞嘧啶(C)胸腺嘧啶(T)
5DNA会级结构二级结构级结构什会概念分类?里面功密切相关说解DNA高级结构高级结构生物功调控方面发挥作?作高级结构言生物体绝部分DNA存高级结构维持种高级结构力者素里?谁控制?谁决定种高级结构?
DNA级结构:4种核苷酸连接排列序表明该DNA分子化学构成
DNA二级结构:两条核苷酸链反行盘绕生成双螺旋结构基特点1两条互相行脱氧核苷酸链长链盘绕成2脱氧核糖磷酸交连接排外侧构成基骨架碱基排列侧两条链碱基通氢键相结合形成碱基
DNA高级结构指DNA双螺旋进步扭曲盘绕形成更复杂特定空间结构包括超螺旋线性双旋中纽结重螺旋等中超螺旋形式包括正超螺旋(右手超螺旋)负超螺旋(左手超螺旋)负超螺旋细胞里常见DNA高级结构形式正超螺旋度缠绕双螺旋类型拓扑异构酶作相互转变(溴化乙锭介入)
DNA高级结构生物功调控方面作:DNA超螺结构整体局部拓扑学变化调控DNA复制RNA转录起关键作
维持DNA级结构力:价键(糖环结构中C—C间键核糖磷酸间核糖碱基间相连键价键磷酸二酯键属价键)
二级结构力:氢键碱基堆积力( 碱基堆积力指条链中相邻碱基间疏水作力范德华力)正负电荷作
高级结构作力:DNA分子末端固定者环状分子双链转动额外张力释放导致DNA分子部空间位置重排造成扭曲出现超螺旋结构
6 果段DNA希质粒DNA中分离出复制子者实验证明段DNA者段区域复制子?者反头说初做?证明?
7 DNA复制程中种样酶?
拓扑异构酶DNA解链酶单链结合蛋白引物合成酶(引发酶)DNA聚合酶DNA连接酶等酶蛋白质参
拓扑异构酶够消解链造成正超螺旋堆积消阻碍解链继续进行种压力复制延伸
DNA解链酶够水解ATP获量解开双链DNA
单链结合蛋白(SSB蛋白)够保证解链酶解开单链复制完成前够保持单链结构没解链作
引物结合酶(引发酶)合成段RNA引导DNA聚合酶起始DNA链合成引物合成酶需引发前体护送催化引物合成
DNA聚合酶够引起脱氧核苷酸间聚合聚合时必须模板链具3’OH末端引物链链延伸方5’—3’(RNA引物3’端合成新DNA链DNA聚合酶 DNA复制模板DNA5'端点开始复制3'端酶
DNA聚合酶活性催化DNA合成(具备模板引物dNTP等情况)相辅活性
真核细胞5种DNA聚合酶分DNA聚合酶α(定位胞核参复制引发具5-3外切酶活性)β(定位核参修复具5-3外切酶活性)γ(定位线粒体参线粒体复制具5-33-5外切活性)δ(定位核参复制具3-55-3外切活性)ε(定位核参损伤修复具3-55-3外切活性)
原核细胞3种DNA聚合酶DNA链延长关DNA聚合酶I单链肽催化单链双链DNA 延长DNA聚合酶II低分子脱氧核苷酸链延长关DNA聚合酶III细胞中存数目促进DNA链延长酶
DNA连接酶相邻冈崎片段连接起形成分子DNA
8 DNA复制三种模型三模型解初DNA复制提出三模型排掉两正确呢?
全保留复制半保留复制机复制(假说演绎法)
谓全保留复制亲代模板复制两条新生成子链全部亲代脱落形成全新子链亲代恢复原样
半保留复制亲代两条链解开条链作新链模板形成两子代DNA分子子代DNA分子包含条亲代链条新合成链
半保留复制证明实验:P43
肠杆菌放15NH4C1培养基中生长15代DNA15N标记细菌移含14NH4C1培养基中培养分取0代1代2代3代细胞提取DNA进行密度梯度离心分辨重链DNA正常轻链DNA包含条重链条轻链DNA杂种链
离心底口DNA分子停留相CsC1密度处紫外光形成区带
14NDNA密度较轻停留离口较位置15NDNA密度较停留较低位置
含15NDNA细胞14NH4C1培养液中培养1代条区带介14NDNA15NDNA间培养2代14NDNA区出现条带等量杂种链轻链密度结果半保留复制模型相符全保留模型排分散模型排Meselson等第1代14N15N杂种链变性双链分开变性前双链单链分进行CsCl密度梯度离心变性前杂种双链种带密度1717gcm3变性两条单链密度呈现两条带条15N带(1740gcm3)条14N带(1725gcm3)作肺炎球菌(D pneumoniae)中提取DNA变性前条带密度1700gcm3结果完全符合半保留复制预期结果否定全保留模型分散模型
9 DNA复制时末端时候会出现缺口引物作防止种缩短呢?
产生原:已知DNA聚合酶RNA聚合酶5’端3’端移动线性DNA复制中RNA引物切留5’端部分单链DNADNA聚合酶作子链短母链
线性DNA复制子末端复制特殊机制:
1 线性复制子转变环状聚分子T4T7噬菌体缺口聚合酶作填满DNA连接酶作生成二联体
2 DNA末端形成发夹结构该分子没游离末端草履虫线性线粒体DNA
3 末端蛋白介入真正末端启动复制腺病毒DNA29噬菌体DNA链取代法末端启动条新链合成取代原双链中配DNA链
10 生物体修复方式老师提8种?什够较详细说出种?
错配修复(DNA复制程中发生错配)碱基切修复(带类型识核酸位点核苷水解酶特异性切受损核苷酸Nβ糖苷键DNA形成嘌呤嘧啶位点统称AP位点)重组修复(复制修复机体细胞复制起始时未修复DNA损伤部位先复制修复新成链留应损伤序列缺口)DNA直接修复(损伤碱基回复原状态种修复)SOS反应(细胞DNA受损伤复制系统受抑制紧急情况求生存产生种应急措施包括DNA损伤修复诱变效应细胞分裂抑制溶原性细菌释放噬菌体)核苷酸切修复(DNA链相应位置核苷酸发生损伤导致双链间法形成氢键)单链缺口修复双链缺口修复较详细说出两三种
11 中心法?提出?
指遗传信息DNA传递RNARNA传递蛋白质完成遗传信息转录翻译程DNA传递DNA完成DNA复制程细胞结构生物遵循法某病毒中RNA复制(烟草花叶病毒等)某病毒中RNA模板逆转录成DNA程(某致癌病毒)中心法补充提出佛朗西斯·克里克
12 转录章节里面提反义链义链编码链非编码链?
mRNA序列相条DNA链成编码链称意义链条根碱基互补配原指导mRNA合成DNA链称模板链称反义链
13转录翻译较学
转录
翻译
模板
DNA
mRNA
原料
核糖核苷酸
氨基酸
产物
RNA
蛋白质
酶
RNA聚合酶
氨酰tRNA合成酶
DNA复制(细胞复制)
转 录
翻 译
概念
DNA复制指DNA双链细胞分裂前进行复制程复制结果条双链变成两条样双链(果复制程正常话)条双链原双链样
DNA分子首先解开双链DNA条链模板碱基互补配原合成RNA程
mRNA模板tRNA运载工具.合成具定氨基酸序蛋白质程K|S|5U
场
细胞核线粒体叶绿体
细胞核线粒体叶绿体K|S|5U
细胞质(核糖体)K|S|5U
原料
4种游离脱氧核苷酸
4种游离核糖核苷酸K|S|5U
20种游离氨基酸K|S|5U
模板
DNA分子中两条链
DNA中条链K|S|5U
mRNA K|S|5U
酶
解旋酶DNA聚合酶等(DNA连接酶)K|S|5U(
解旋酶RNA聚合酶等
求氨基酰tRNA合成酶氨肽酶等K|S|5U
量
ATP
ATP
ATP
程
1解旋:解旋酶作利ATP释放量解开双螺旋2DNA聚合酶作碱基互补配原游离脱氧核苷酸连接模板链脱氧核苷酸间磷酸二酯键连接3着模板链断延伸终形成两模样DNA分子
1解旋:解旋酶作利ATP释放量解开双螺旋2解开条DNA链模板碱基互补配原游离核糖核苷酸脱氧核苷酸配3核糖核苷酸间通磷酸二酯键连接成RNA(mRNAtRNArRNA)
mRNA核孔进入细胞质核糖体结合起始密码子(AUG)开始翻译tRNA端携带氨基酸进入核糖体.端反密码子mRNA密码子配两氨基酸间形成肽键核糖体继续mRNA 移动次移动密码子终止密码结束肽链形成
模板
复制模板链新形成子链形成双螺旋结构
转录模板链非模板链重新形成双螺旋结构
分解成核糖核苷酸
特点
1边解旋边复制2半保留复制
边解旋边转录
条mRNA核糖体结合翻译成条相肽链
产物
形成两完整DNA分子
三种单链RNA
蛋白质(肽链)
14转录单位?启动子?终止子?
转录单位:段启动子开始终止子结束DNA序列RNA聚合酶转录起点开始着模板前进直终止子止转录出条RNA链简单转录单位携带合成种蛋白质信息复合转录单位携带止种蛋白质分子信息
启动子:基转录起始必需段DNA序列基表达调控游式作元件段位结构基5’端游区DNA序列活化RNA聚合酶模板DNA准确相结合具转录起始特异性
终止子:位已转录序列中RNA聚合酶辅助子识终止信号
15初通实验确定转录起始区域?两实验什相似处?实验者两实验分证明质粒部分复制?部分转录?(写概思路)
引物延伸分析 引物延伸实验标定转录产物5`端 确定转录精确起始特异末端标记引物退火RNA链互补区域RNA作模板反转录酶延伸引物cDNA扩增产物连接入质粒载体测序测序结果5'端转录起始位点通常真核生物中转录起始位点距ATG翻译起始位点游100bp左右包含明显TATA box序列
实验区分质粒复制转录:提供放射性3H标记脱氧核苷酸作细菌脱氧核苷酸源利放射显影图方法果进行复制观察放射性标记DNA链产生进行翻译会述现象
16原核真核启动子差?联合起启动子起概念增强子启动子(解)
原核生物:绝数启动子存两端序列:位10bp处TTAA区35bp位TTGACA区现已查明10bp位TTAA区35区TTGACA区RNA聚合酶启动子结合位点σ子相互识具高亲力
真核生物:类似原核生物区域位转录位点游25~30bp处序列TATAA称TATA区外起始位点游70~78bp段序列CCAAT原核生物35bp区相应称CAAT区80~110含GCCACACCCGGGCGGG(GC区GCbox)惯TATA区游保守序列称游启动子元件(UPE)称游激活序列(UAS)外数真核基含增强子区
增强子:连锁基转录频率明显增加DNA序列强化转录起始称强化子启动子部分
启动子14
17转录信RNA加工?块解加工直接
真核生物转录生成初级转录产物具备生物活性独立功前体RNA必须适加工处理(切含子外显子拼接形成成熟mRNA)变成熟活性RNA
18转录加工什样呢?带帽加尾等
带帽:mRNA5’端加G成帽子结构帽子会甲基化
帽子结构(G)GTP原mRNA 5’三磷酸腺苷鸟苷缩合反应产物加帽子程鸟苷酸转移酶作进行分零号帽子1号帽子2号帽子
帽子功:1mrna免受核酸酶破坏2mrna更容易蛋白质合成起始子识促进蛋白质合成3提高翻译效率4提高mrna剪接效率
加尾:mRNA3’端切酶切开特定部位(A)合成酶催化合成(A)结构
功:mrna细胞核进入细胞质基质必须形式提高mrna细胞质基质中稳定性保护mrna延长mrna寿命参控制翻译效率
RNA剪接:RNA中分子中切含子mrna前体分子中切称含子非编码区基中称外显子编码区拼接形成成熟mrna
RNA切割:前体RNA中释放成熟tRNArRNA分子
19诺贝尔奖获——具催化活性RNA核酶考核重点
核酶(ribozyme):类具催化功RAN分子通催化靶位点RNA链中磷酸二酯键断裂特异性切底物RNA分子阻断基表达
核酶具种空间结构目前已知锤头型核酶发夹形核酶具剪切力RNA数形成锤头型结构该结构特点三茎(ⅠⅡⅢ)茎区互补碱基构成局部双链结构包围着11~13保守核苷酸构成催化活性中心
核酶切通常发生H(G外核苷酸)核酶分子具催化中心核酶含剪切位点底物部分组成锤头型结构底物部分切割部位两端核苷酸核酶茎Ⅰ 茎Ⅲ结合切割该底物释放新底物取代切割反应重复进行
核酶分两类:剪切型核酶剪接型核酶
剪切型核酶剪接够催化身RNA者RNA分子切特异核苷酸序列
剪接型核酶具序列特异切核酸酶RNA连接酶等种酶活性切割RNA分子通转酯反应连接切割RNA分子
锤头型发夹型结构核酶催化产物连接发夹型核酶连接活性高身切割活性10倍锤头型切割反应活性高连接反应活性100倍
意义:核酶发现基治疗提供新策略根剪接特点工合成种核酶抑制破坏病毒癌基等害基功RNA重功新认识生命起源研究提供新思路
20tRNA转录加工较特涉步修饰?步修饰应功密切相关重点解道跨章节题目修饰功密切里?什修饰?
含子剪接切tRNA中含子
作:切含子tRNA成熟
(肠杆菌RNase P特异剪切tRNA前体5’旁序tRNA前体剪切尚需3’核酸切酶tRNA前体3’端段核苷酸序列切外RNaseDtRNA3’端成熟酶)
3’端添加CCA作添加CCAOH结构哎蛋白质翻译中具生物活性
核苷酸修饰高级结构:tRNA运载氨基酸必须核糖体亚基肽合成位点tRNA反密码子必须亚基mRNA相配求结构中基团限度分离
21密码起始密码子什样?终止密码子什样?张表遗传密码存什特征?纳总结
起始密码子:指定蛋白质合成起始位点密码子两甲硫氨酸AUG缬氨酸GUG
终止密码子:tRNA分子识特殊蛋白结合引起新合成肽链核糖体释放密码子(没相应tRNA存)UAAUAGUGA
密码表遗传密码特征:
密码子连续性:翻译5’端起始密码子开始直3’端终止密码子结束中没间断者重叠起始密码子决定续密码子位置说明三联子密码连续
密码子简性:种氨基酸种密码子相应(第三碱基具摆动现象保证物种稳定性)
种密码子编码氨基酸现象称简应氨基酸密码子称密码子(氨基酸序列会某碱基意外换导致氨基酸错误)外AUGGUG甲硫氨酸缬氨酸密码子起始密码子具双重功(编码某氨基酸密码子越氨基酸蛋白质中出现频率越高)
密码子通性特殊性:遗传密码体外体病毒生物言通
密码子反密码子相互作:密码子反密码子碱基互补配
22蛋白翻译加工转录加工?
蛋白质
RNA
加工程
N端fMetMet切二硫键形成特定氨基酸修饰相处新生肽中非功片段
加帽子反应加尾(A)反应RNA剪接RAN切割
产物
蛋白质
RNA
酶
蛋白酶
核酸切酶
23分子生物学常技术方面重点注意工具酶CAS9argo工具酶?限制性切酶重点?说什特点啊?(两道题)
酶区
NgAgo 23~25nt DNACRISPR系统
DNA相RNA优点明显DNADNA识精确度效率理般RNADNA识高文章测试NgAgo碱基错配容忍度单碱基会明显降低效率碱基错配完全失活性认Cas9优势Cas9时候错配56碱基样切
赖特殊结构ssDNA限制系统通性ssDNA含量较高物种
长度限制基NgAgo基编辑外没什拓展性谈Ago结合13~25ntssDNA25碱基全识ssDNA设计功
Cas9技术基础科学应玩五花八门全赖gRNA识区段外空间设计功包括限:募集转录子控制基表达(Stanley Qi Lab)募集荧光蛋白进行定点标记(Stanley Qi Lab)加段lncRNA研究非编码RNA调控功 (John Rinn Lab)招募单碱基置换酶
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