GB 478942016沙门氏菌血清学鉴定验分享
沙门氏菌肠道病原菌根OH抗原组成分血清型目前已发现2500血清型绝数血清型引起类疾病中伤寒副伤寒沙门菌引起伤寒副伤寒沙门菌血清型引起类腹泻食物中毒事件统称非伤寒沙门菌该菌通污染食物动物性食品传播列食源性疾病
目前沙门氏菌全球范围导致急性食源性疾病首素中华民国传染病防治法中伤寒副伤寒沙门氏菌感染列乙类传染病非伤寒沙门氏菌列丙类传染病中感染性腹泻乙类丙类传染病理防控许差节约理防控力成减少必浪费准确鉴定沙门氏菌血清型尤重GB 478942016标准中血清鉴定分价血清鉴定血清学分型谈谈实际工作中做法
试剂耗材准备
次性灭菌皿（7cm9cm）台灯诊断血清（宁波天润60种）黑底台面吸尖（200μL10μL）10μL移液器营养琼脂（北京陆桥）Swarm agar琼脂（北京陆桥）085盐水
1 次性灭菌皿： 7cm菌株鞭毛复苏培养琼脂高度求少达皿合起时直径点皿切线图1保证菌株生长需营养条件样9cm皿节约琼脂量皿直径利操作影响菌株生长续试验9cm代玻片做血清凝集试验图2
红色代表琼脂厚度定超蓝色皿算合格
图1 皿厚度
图2皿（90mm）
2 台灯：提供距离光源图3
图3 台灯
3 诊断血清：国产宁波天润天津生物芯片国外丹麦SSI泰国S&A日生研美国BD图4般检测室宁波天润满足日常需实验室宁波天润沙门氏菌血清鉴定60种
图4 宁波天润（左）丹麦SSI（右）天津生物芯片（）血清
4 黑底台面：重观察血清否凝集结果提供黑色背景实验室台面墙面黑色忽略条图5
黑色背景
图5 黑色背景
5 吸尖移液器：加入血清挑取菌落家会问血清瓶子带滴移液器加？滴加血清点浪费移液器加3μL足够家知道血清较贵1瓶血清1ml果检测量较快会完移液器加入血清保证次加入量准确节约血清200μL吸尖挑取菌落什吸尖接种环？吸尖较短会弯曲特挑取软琼脂中菌落时会琼脂挑出图6
图6 吸尖（左）移液器（右）
6 营养琼脂Swarm agar琼脂：生产厂家均北京陆桥营养琼脂菌株纯培养纯培养O抗原凝集Swarm agar琼脂鞭毛复苏位相变异试验图7
图7 营养琼脂（左）Swarm agar琼脂（右）
7 085生理盐水：川东化工实验室配血清学鉴定阴性检查菌株否凝性图8
图8生理盐水（085）
二 操作步骤
肠杆菌科中许菌抗原沙门氏菌O抗原间存交叉凝集反应血清鉴定前该菌株生化鉴定必须符合沙门氏菌生化符血清凝集结果肯定存问题提前天需鉴定菌株接种营养琼脂板
（） O血清凝集方法
1 首先排凝集反应 吸取3μL生理盐水 枪头挑取营养琼脂中单菌落述滴加血清旁边轻触次余菌刮掉枪头占少许菌体生理盐水混合成均性混浊悬液皿轻轻摇动30s~60s黑色背景观察反应出现见菌体凝集认凝性反凝性果发现凝菌株进行分型
2 A~F价O血清凝集方法：述生理盐水换成A~F价血清重复述操作观察凝集情况做记录图9
图9 血清凝集记录表
3 A~F价血清凝集者次试剂盒中O子单价血清述方法继续凝集
4 技巧O子单价血清凝集时首先选时常见O子单价血清提高血清凝集效率鼠伤寒沙门氏菌O4肠炎沙门氏菌O9等
5 A~F价O血清凝集时应进行Vi抗原凝集具体操作见GB 47894标准Vi抗原凝集需考虑生化试验否准确确定生化试验没问题非A~F群沙门氏菌含群血清试剂盒
（二） H血清凝集方法
1 H 抗原复苏：鉴定O血清单菌落点种（接种环接触Swarm agar琼脂板表面5s力压琼脂反复点压琼脂）Swarm agar琼脂板中间36℃培养68时O子血清已确定菌株马进行H抗原鉴定效果肯定没复苏
2 培养68时先凝集H价血清凝集H单价血清操作O子血清应挑取Swarm agar琼脂扩散边缘菌苔
3 H血清均凝集重复第步操作复苏H抗原23次
4 凝集出H血清相该菌非单相菌应做位相变异试验
（三） 位相变异试验
GB 478942016标准中3方法：简易板法玻法倒法建议简易板法冷46℃Swarm agar琼脂倒入7cm皿加入述凝集H相血清2~3滴混匀凝固点种相应菌株培养进行血清凝集试验
位相变异试验成功关键软琼脂培养基培养基太硬点种菌株易扩散1扩散情况：该菌株鞭毛发育全需反复传代鞭毛复苏讨琼脂较硬问题
图10培养基太软点种菌株会生长培养基部凝集试验操作时挑取菌苔琼脂挑出图11
图10 琼脂太硬未扩散
图11 琼脂太软生长培养基部
标准中规定035~04半固体琼脂板厂家半固体琼脂板做位相变异试验较Swarm agar琼脂表1
培养基名称
生产厂家
培养图片
效果评价
半固体培养基
青岛海博
菌株点种培养扩散生长均匀生长琼脂部挑取做凝集试验
半固体培养基
北京陆桥
面效果相
Swarm agar琼脂
北京陆桥
菌株点种培养扩散生长均匀生长琼脂表面吸尖容易挑取菌苔做凝集试验(推荐)
表1 厂家半固体琼脂板位相变异试验结果较
做沙门氏菌血清学鉴定中点验处请批评指正
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沙门氏菌肠道病原菌根OH抗原组成分血清型目前已发现2500血清型绝数血清型引起类疾病中伤寒副伤寒沙门菌引起伤寒副伤寒沙门菌血清型引起类腹泻食物中毒事件统称非伤寒沙门菌该菌通污染食物动物性食品传播列食源性疾病
目前沙门氏菌全球范围导致急性食源性疾病首素中华民国传染病防治法中伤寒副伤寒沙门氏菌感染列乙类传染病非伤寒沙门氏菌列丙类传染病中感染性腹泻乙类丙类传染病理防控许差节约理防控力成减少必浪费准确鉴定沙门氏菌血清型尤重GB 478942016标准中血清鉴定分价血清鉴定血清学分型谈谈实际工作中做法
试剂耗材准备
次性灭菌皿（7cm9cm）台灯诊断血清（宁波天润60种）黑底台面吸尖（200μL10μL）10μL移液器营养琼脂（北京陆桥）Swarm agar琼脂（北京陆桥）085盐水
1 次性灭菌皿： 7cm菌株鞭毛复苏培养琼脂高度求少达皿合起时直径点皿切线图1保证菌株生长需营养条件样9cm皿节约琼脂量皿直径利操作影响菌株生长续试验9cm代玻片做血清凝集试验图2
红色代表琼脂厚度定超蓝色皿算合格
图1 皿厚度
图2皿（90mm）
2 台灯：提供距离光源图3
图3 台灯
3 诊断血清：国产宁波天润天津生物芯片国外丹麦SSI泰国S&A日生研美国BD图4般检测室宁波天润满足日常需实验室宁波天润沙门氏菌血清鉴定60种
图4 宁波天润（左）丹麦SSI（右）天津生物芯片（）血清
4 黑底台面：重观察血清否凝集结果提供黑色背景实验室台面墙面黑色忽略条图5
黑色背景
图5 黑色背景
5 吸尖移液器：加入血清挑取菌落家会问血清瓶子带滴移液器加？滴加血清点浪费移液器加3μL足够家知道血清较贵1瓶血清1ml果检测量较快会完移液器加入血清保证次加入量准确节约血清200μL吸尖挑取菌落什吸尖接种环？吸尖较短会弯曲特挑取软琼脂中菌落时会琼脂挑出图6
图6 吸尖（左）移液器（右）
6 营养琼脂Swarm agar琼脂：生产厂家均北京陆桥营养琼脂菌株纯培养纯培养O抗原凝集Swarm agar琼脂鞭毛复苏位相变异试验图7
图7 营养琼脂（左）Swarm agar琼脂（右）
7 085生理盐水：川东化工实验室配血清学鉴定阴性检查菌株否凝性图8
图8生理盐水（085）
二 操作步骤
肠杆菌科中许菌抗原沙门氏菌O抗原间存交叉凝集反应血清鉴定前该菌株生化鉴定必须符合沙门氏菌生化符血清凝集结果肯定存问题提前天需鉴定菌株接种营养琼脂板
（） O血清凝集方法
1 首先排凝集反应 吸取3μL生理盐水 枪头挑取营养琼脂中单菌落述滴加血清旁边轻触次余菌刮掉枪头占少许菌体生理盐水混合成均性混浊悬液皿轻轻摇动30s~60s黑色背景观察反应出现见菌体凝集认凝性反凝性果发现凝菌株进行分型
2 A~F价O血清凝集方法：述生理盐水换成A~F价血清重复述操作观察凝集情况做记录图9
图9 血清凝集记录表
3 A~F价血清凝集者次试剂盒中O子单价血清述方法继续凝集
4 技巧O子单价血清凝集时首先选时常见O子单价血清提高血清凝集效率鼠伤寒沙门氏菌O4肠炎沙门氏菌O9等
5 A~F价O血清凝集时应进行Vi抗原凝集具体操作见GB 47894标准Vi抗原凝集需考虑生化试验否准确确定生化试验没问题非A~F群沙门氏菌含群血清试剂盒
（二） H血清凝集方法
1 H 抗原复苏：鉴定O血清单菌落点种（接种环接触Swarm agar琼脂板表面5s力压琼脂反复点压琼脂）Swarm agar琼脂板中间36℃培养68时O子血清已确定菌株马进行H抗原鉴定效果肯定没复苏
2 培养68时先凝集H价血清凝集H单价血清操作O子血清应挑取Swarm agar琼脂扩散边缘菌苔
3 H血清均凝集重复第步操作复苏H抗原23次
4 凝集出H血清相该菌非单相菌应做位相变异试验
（三） 位相变异试验
GB 478942016标准中3方法：简易板法玻法倒法建议简易板法冷46℃Swarm agar琼脂倒入7cm皿加入述凝集H相血清2~3滴混匀凝固点种相应菌株培养进行血清凝集试验
位相变异试验成功关键软琼脂培养基培养基太硬点种菌株易扩散1扩散情况：该菌株鞭毛发育全需反复传代鞭毛复苏讨琼脂较硬问题
图10培养基太软点种菌株会生长培养基部凝集试验操作时挑取菌苔琼脂挑出图11
图10 琼脂太硬未扩散
图11 琼脂太软生长培养基部
标准中规定035~04半固体琼脂板厂家半固体琼脂板做位相变异试验较Swarm agar琼脂表1
培养基名称
生产厂家
培养图片
效果评价
半固体培养基
青岛海博
菌株点种培养扩散生长均匀生长琼脂部挑取做凝集试验
半固体培养基
北京陆桥
面效果相
Swarm agar琼脂
北京陆桥
菌株点种培养扩散生长均匀生长琼脂表面吸尖容易挑取菌苔做凝集试验(推荐)
表1 厂家半固体琼脂板位相变异试验结果较
做沙门氏菌血清学鉴定中点验处请批评指正
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