实验目:
1 解模拟免疫干实验方法意义掌握protein软件提纯蛋白质方法
2 进步熟悉层析热变性盐析等常生化分离方法原理应
二 实验原理:
Protein软件36务36组分离纯化蛋白务求利软件提供种实验技术提纯目蛋白终达单电泳条带双电泳点时费(根提取步骤计算)超特定值务开始时软件出目蛋白性质热稳定温度范围pH稳定范围等利信息实验少走弯路
Protein提供分离纯化方法七种:①热变性②硫铵沉淀③排阻层析(凝胶色谱)④离子交换层析⑤吸附层析⑥聚焦层析⑦制备电泳
Protein提供种分离纯化方法中热变性法盐析法较粗提方法提纯早期效果较层析种方法中强力方法制备电泳然纯化倍数高回收率低种层析方法中离子交换层析效易耗费时费较少排层层析聚焦层析耗费较某特定情况两种方法代
Protein提供四种电泳方法:SDSPAGEPAGE等电聚焦电泳双电泳电泳方法检测样品纯度出样品信息分子量等电点等信息续提纯重参考价值等电聚焦电泳PAGE制备
实验求完成实验软件中三种酶分离纯化
㈠ Windows 1号酶
1号酶酵母体产生50℃稳定稳定pH范围2~11
分离纯化步骤
1热变性:
2 离子交换层析:
3 吸附层析:
4 电泳检测
①DIDEM 检测
②ISOELEC 检测
③PAGE检测
④SDSPAGE检测
酶PI44左右Mr30000左右
㈡Windows 5号酶
5号酶53℃稳定稳定pH范围63~126
分离纯化步骤:
1热变性
2吸附层析
3凝胶色谱
4 电泳分析
①DIDEM 检测
②ISOELEC 检测
③PAGE检测
④SDSPAGE检测
酶PI7左右Mr66000左右
㈢Windows 27号酶
27号酶38℃稳定稳定pH范围52~99
分离纯化步骤
1热变性
2吸附层析
3凝胶色谱
4电泳检测
①DIDEM 检测
②ISOELEC 检测
③PAGE检测
④SDSPAGE检测
酶PI46左右Mr66000左右
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