附件8
液体乳中三聚氰胺快速检测
拉曼光谱法
（KJ201908）
1 范围
方法规定液体乳制品中三聚氰胺快速测定方法
方法适生鲜乳灭菌乳巴氏杀菌乳调制乳发酵乳等液态乳制品中三聚氰胺含量快速测定
2 原理
样品沉淀溶剂提取加表面增强拉曼试剂信号增强进行拉曼光谱扫描704±10cm1处拉曼特征峰作三聚氰胺定量基准峰925±10cm1类似基质中稳定存拉曼峰参峰根三聚氰胺峰参峰相强度三聚氰胺浓度绘制标准曲线置仪器进行判
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯水GBT 6682规定二级水
31 试剂
311 三氯乙酸
312 三氯乙酸溶液（5）：准确称取三氯乙酸（311）50 g1 L容量瓶中水溶解定容刻度混匀备
313 表面增强试剂：金银纳米粒子溶胶相者
注：表面增强试剂参考配制方法：
纳米金溶胶：取100mL001氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加热沸剧烈搅拌准确加入10mL 1柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液金黄色氯金酸水溶液2min变红色继续煮沸15min冷蒸馏水补加100mL增强试剂配制水GBT 6682规定级水
纳米银溶胶：取200mL10mM硝酸银（AgNO3）水溶液加热沸腾剧烈搅拌逐滴准确滴加50mL1柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液持续煮沸1h溶液变灰绿色冷蒸馏水补加200mL增强试剂配制水GBT 6682规定级水
314 促凝剂：金溶胶促凝剂：称取585 g氯化钠溶100 mL水中摇匀备配制成相机盐溶液银溶胶促凝剂：称取585 g氯化钠2 g氢氧化钠溶100 mL水中摇匀备配制成相机盐溶液
32 参考物质
三聚氰胺参考物质中文名称英文名称CAS号分子式相分子质量见表1纯度≥99
表1 三聚氰胺中文名称英文名称CAS登记号分子式相分子质量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子质量
三聚氰胺
Melamine
108781
C3H6N6
12612
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
三聚氰胺标准工作液（500 µgmL）：精密称取三聚氰胺标准品（32）适量分置100 mL容量瓶中水溶解稀释刻度摇匀制成浓度500 μgmL标准储备液4℃避光保存效期1月
4 仪器设备
41 便携式拉曼光谱仪
稳频激光光源：发射波长785±1 nm线宽<01 nm量≥250 mW光谱分辨率≤15 cm1光谱响应范围500 cm1~2000 cm1该响应范围
42 移液器：200 µL1 mL5 mL
43 涡旋振荡器
44 离心机：转速≥6000 rmin
45 电子天：感量001 g
46 塑料具塞离心：2 mL
5 分析步骤
51 试样提取
取05 g样品加2 mL离心中加入1ml 5三氯乙酸溶液涡旋30 s混匀放入离心机低6000 rmin转速离心1 min清液备
52 测定步骤
521 拉曼光谱仪器参考条件
激光量≥250 mW数采集时间≥2 s
522 测定
仪器样品池中次加入100 µL促凝剂100 µL表面增强试剂50 µL样品（51）快速摇晃均匀等20 s检测（检测需样品加入1 min完成）
53 质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
531 空白试验
称取空白试样5152步骤样品法操作
532 加标质控试验
准确称取空白试样10 g置15 mL具塞离心中加入50 μL三聚氰胺标准工作液（500 µgmL）（33）三聚氰胺浓度25 mgkg5152步骤样品法操作
6 结果判定求
仪器软件测试结果标准谱图库中三聚氰胺进行匹配计算根谱图704 cm1（±10 cm1）处特征拉曼光谱置校准曲线样品中三聚氰胺进行结果判定：显示测试结果判定阴性阳性阴性代表该样品含三聚氰胺低25 mgkg阳性代表该样品含三聚氰胺等25 mgkg液态乳表面增强拉曼光谱图参见图1
图1 液态乳表面增强拉曼光谱图
61 质控试验求
空白试样测定结果应阴性加标质控样品测定结果应阳性
7 性指标
71 检测限
25mgkg
72 灵敏度
灵敏度应≥99
73 特异性
特异性应≥85
74 假阴性率
假阴性率应≤1
75 假阳性率
假阳性率应≤15
注：性指标计算方法见附录A
8 确证
方法初筛方法检测结果阳性时应结果进行确证
9
方法述纳米表面增强试剂促凝剂信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定方法者代试剂操作步骤前须进行考察应满足方法规定项性指标
方法参标准GBT 223882008 原料乳乳制品中三聚氰胺检测方法
附录A
快速检测方法性计算表
表A1 性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N12
N2N21+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异(х2)
c2(|N12N21|1)2(N12+N21)
度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位：江苏省食品药品监督检验研究院
验证单位：山东省食品药品检验研究院江南学四川省食品药品检验检测院
起草：徐春祥张渊张征颜春荣胡明燕刘丽强姚欢
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液体乳中三聚氰胺快速检测
拉曼光谱法
（KJ201908）
1 范围
方法规定液体乳制品中三聚氰胺快速测定方法
方法适生鲜乳灭菌乳巴氏杀菌乳调制乳发酵乳等液态乳制品中三聚氰胺含量快速测定
2 原理
样品沉淀溶剂提取加表面增强拉曼试剂信号增强进行拉曼光谱扫描704±10cm1处拉曼特征峰作三聚氰胺定量基准峰925±10cm1类似基质中稳定存拉曼峰参峰根三聚氰胺峰参峰相强度三聚氰胺浓度绘制标准曲线置仪器进行判
3 试剂材料
规定外方法试剂均分析纯水GBT 6682规定二级水
31 试剂
311 三氯乙酸
312 三氯乙酸溶液（5）：准确称取三氯乙酸（311）50 g1 L容量瓶中水溶解定容刻度混匀备
313 表面增强试剂：金银纳米粒子溶胶相者
注：表面增强试剂参考配制方法：
纳米金溶胶：取100mL001氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加热沸剧烈搅拌准确加入10mL 1柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液金黄色氯金酸水溶液2min变红色继续煮沸15min冷蒸馏水补加100mL增强试剂配制水GBT 6682规定级水
纳米银溶胶：取200mL10mM硝酸银（AgNO3）水溶液加热沸腾剧烈搅拌逐滴准确滴加50mL1柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液持续煮沸1h溶液变灰绿色冷蒸馏水补加200mL增强试剂配制水GBT 6682规定级水
314 促凝剂：金溶胶促凝剂：称取585 g氯化钠溶100 mL水中摇匀备配制成相机盐溶液银溶胶促凝剂：称取585 g氯化钠2 g氢氧化钠溶100 mL水中摇匀备配制成相机盐溶液
32 参考物质
三聚氰胺参考物质中文名称英文名称CAS号分子式相分子质量见表1纯度≥99
表1 三聚氰胺中文名称英文名称CAS登记号分子式相分子质量
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子质量
三聚氰胺
Melamine
108781
C3H6N6
12612
注：等溯源物质
33 标准溶液配制
三聚氰胺标准工作液（500 µgmL）：精密称取三聚氰胺标准品（32）适量分置100 mL容量瓶中水溶解稀释刻度摇匀制成浓度500 μgmL标准储备液4℃避光保存效期1月
4 仪器设备
41 便携式拉曼光谱仪
稳频激光光源：发射波长785±1 nm线宽<01 nm量≥250 mW光谱分辨率≤15 cm1光谱响应范围500 cm1~2000 cm1该响应范围
42 移液器：200 µL1 mL5 mL
43 涡旋振荡器
44 离心机：转速≥6000 rmin
45 电子天：感量001 g
46 塑料具塞离心：2 mL
5 分析步骤
51 试样提取
取05 g样品加2 mL离心中加入1ml 5三氯乙酸溶液涡旋30 s混匀放入离心机低6000 rmin转速离心1 min清液备
52 测定步骤
521 拉曼光谱仪器参考条件
激光量≥250 mW数采集时间≥2 s
522 测定
仪器样品池中次加入100 µL促凝剂100 µL表面增强试剂50 µL样品（51）快速摇晃均匀等20 s检测（检测需样品加入1 min完成）
53 质控试验
批样品应时进行空白试验加标质控试验
531 空白试验
称取空白试样5152步骤样品法操作
532 加标质控试验
准确称取空白试样10 g置15 mL具塞离心中加入50 μL三聚氰胺标准工作液（500 µgmL）（33）三聚氰胺浓度25 mgkg5152步骤样品法操作
6 结果判定求
仪器软件测试结果标准谱图库中三聚氰胺进行匹配计算根谱图704 cm1（±10 cm1）处特征拉曼光谱置校准曲线样品中三聚氰胺进行结果判定：显示测试结果判定阴性阳性阴性代表该样品含三聚氰胺低25 mgkg阳性代表该样品含三聚氰胺等25 mgkg液态乳表面增强拉曼光谱图参见图1
图1 液态乳表面增强拉曼光谱图
61 质控试验求
空白试样测定结果应阴性加标质控样品测定结果应阳性
7 性指标
71 检测限
25mgkg
72 灵敏度
灵敏度应≥99
73 特异性
特异性应≥85
74 假阴性率
假阴性率应≤1
75 假阳性率
假阳性率应≤15
注：性指标计算方法见附录A
8 确证
方法初筛方法检测结果阳性时应结果进行确证
9
方法述纳米表面增强试剂促凝剂信息操作步骤方法者提供方便方法时做限定方法者代试剂操作步骤前须进行考察应满足方法规定项性指标
方法参标准GBT 223882008 原料乳乳制品中三聚氰胺检测方法
附录A
快速检测方法性计算表
表A1 性指标计算方法
样品情况a
检测结果b
总数
阳性
阴性
阳性
N11
N12
N1N11+N12
阴性
N21
N22
N2N21+N22
总数
N1N11+N12
N2N21+N22
NN1+N2N1+N2
显著性差异(х2)
c2(|N12N21|1)2(N12+N21)
度（df）1
灵敏度（p+）
p+N11N1
特异性（p）
pN22N2
假阴性率（pf）
pfN12N1100灵敏度
假阳性率（pf+）
pf+N21N2100特异性
相准确度c
（N11+N22）(N1+N2)
注：
a参方法检验结果者样品中实际公议值结果
b确认方法检验结果灵敏度计算确认结果
N：特定单元结果数第标指行第二标指列例：N11表示第行第列N1表示第行N2表示第二列N12表示第行第二列
C方法检测结果相准确性结果致性分析浓度检测趋势情况综合评价
方法负责起草单位：江苏省食品药品监督检验研究院
验证单位：山东省食品药品检验研究院江南学四川省食品药品检验检测院
起草：徐春祥张渊张征颜春荣胡明燕刘丽强姚欢
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