附件2
食品中辛基酚等5种酚类物质测定
BJS 201913
1 范围
标准规定食品中辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A液相色谱串联质谱测定方法
标准适婴配方食品畜肉禽蛋水产品罐头食品植物油中辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A测定
2原理
试样中加入位素标乙腈提取离心取清液固相萃取柱净化采液相色谱串联质谱仪测定标法定量
3试剂材料
行规定外实验试剂均分析纯水GBT 6682规定级水
31 试剂
311 甲醇（CH3OH）：质谱级
312 乙腈（CH3CN）：质谱级
313 氨水（NH4OH）：色谱级
32 试剂配制
005 氨水溶液（VV）：取氨水（313）05mL水稀释1000 mL
33 标准品
辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A标准物质辛基酚13C6正辛基酚D17壬基酚13C
6正壬基酚D4双酚A D4位素标中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见附录A表A1纯度≥98
34 标准溶液配制
341标准储备溶液（100 mgL）：分称取辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A标准物质（33）10 mg（精确0000 1 g）甲醇（311）溶解转移100 mL容量瓶中定容刻度标准储备液浓度100 mgL溶液转移试剂瓶中贮存20 ℃冰箱中效期12月
342混合标准中间溶液（1 mgL）：分准确吸取辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A标准储备液(100 mgL)(341) 1 mL100mL容量瓶中 甲醇定容刻度摇匀制成1 mgL混合标准中间溶液溶液转移试剂瓶中置4 ℃冰箱中保存效期3月
343位素标标准储备溶液（100 mgL）：分称取辛基酚13C6正辛基酚D17壬基酚13C6正壬基酚D4双酚A D4位素标（33）10 mg（精确0000 1 g）甲醇（311）溶解转移100 mL容量瓶中定容刻度标准储备液浓度100 mgL溶液转移试剂瓶中贮存20 ℃冰箱中效期12月
344位素标混合标准中间溶液（1 mgL）：分准确吸取辛基酚13C6正辛基酚D17壬基酚13C6正壬基酚D4双酚A D4位素标标准储备液(100 mgL)(343)1 mL100 mL容量瓶中甲醇定容刻度摇匀制成1 mgL混合标准中间溶液溶液转移试剂瓶中置4 ℃冰箱中保存效期3月
345 位素标混合标准工作液（100 μgL）：分准确吸取位素标标准储备液(1 mgL)(344)1 mL10mL容量瓶中 甲醇定容刻度摇匀制成100 μg L混合标准工作液时配制
346混合标准工作溶液：分准确吸取混合标准中间液 (1 mgL)(342)适量加入位素标混合标准中间溶液（1 mgL）(344)辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A浓度分05 μgL1 μgL5 μgL10 μgL20 μgL50 μgL混合标准系列工作溶液时配制
35 材料
固相萃取柱（官化聚苯乙烯二乙烯苯萃取柱）：200 mg6 mL
4 仪器设备
41高效液相色谱串联质谱仪配电喷雾（ESI）离子源
42天：感量分0001g0000 1 g
43涡旋混合器
44 离心机：转速≥8000 rmin
45 超声波清洗器
5 分析步骤
51 试样制备
511 乳粉米粉：试样混合均匀密封标明标记20℃冰箱冷藏保存
512 禽蛋：取代表性试样约200 g壳组织匀浆机搅拌均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
513水产品畜肉：取代表性试样约200 g匀浆机匀浆均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
514 植物油：试样混合均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
515 罐头食品：取罐头中固形物试样约50 g 匀浆机匀浆均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
冷藏保存样品解冻需次匀浆机均质
52 提取
准确称取1 g（精确0001 g）样品15 mL具塞玻璃试中加入01mL位素标混合标准工作液（100 μgL）(345) 5 mL乙腈（312）涡旋混匀超声提取15 min8000 rmin离心5 min取层乙腈相残留部分5 mL 乙腈重复提取次合乙腈相置冰箱20℃冷冻2h取出8000 rmin离心5 min取清液净化
53 净化
取固相萃取柱（35）前18 mL甲醇活化6mL水衡52项清液加30 mL水稀释充分摇匀1 mLmin~2 mLmin 速度样弃滤液12 mL60 甲醇水溶液（VV）淋洗弃淋洗液6 mL乙腈洗脱洗脱液50℃氮气吹干1 mL甲醇溶解残渣测
54 空白试验
加样品外采相分析步骤进行操作
55仪器参考条件
551色谱条件
a) 分析柱： C18 柱（3 μm50 mm × 3 mm）性相者捕集柱： C18 柱（5 μm50 mm × 46 mm）性相者捕集柱位进样阀前
b）流动相：A005氨水溶液（32）B甲醇（311）洗脱梯度见表1
c）流速：400 μLmin
d) 柱温：30℃
e) 进样量：10 μL
表1 梯度洗脱程序表
时间（min）
A()
B()
0
70
30
9
5
95
145
5
95
1451
70
30
18
70
30
552 质谱条件
a) 离子源：电喷雾离子源（ESI源）
b) 检测方式：反应离子监测（MRM）
c) 碰撞气高纯氮气干燥气雾化气鞘气等均氮气合适气体前应调节相应参数质谱灵敏度达检测求毛细电压干燥气温度鞘气温度鞘气流量喷嘴电压碰撞量碎裂电压等参数应优化佳灵敏度监测离子定量离子等信息详见附录B
56 定性测定
超高效液相色谱三重四极杆串联质谱条件测定试样标准工作溶液记录试样标准溶液中化合物色谱保留时间试样中检出某标准品色谱峰保留时间致色谱峰（变化范围±25）试样色谱图中选择监测离子相丰度相浓度标准溶液离子相丰度（k）偏差超表2规定范围确定试样中检出相应化合物
表2 定性确证时相离子丰度允许偏差
相离子丰度（）
k＞50
50≥k＞20
20≥k＞10
k≤10
允许偏差（）
± 20
± 25
± 30
± 50
57定量测定
571标准曲线制作
混合标准工作溶液（346）分仪器参考条件（55）进行测定目标化合物峰面积标峰面积值根标准曲线测液中目标化合物浓度
品色谱图参见附录C
572试样溶液测定
试样溶液（53）仪器参考条件（55）进行测定相应样品溶液色谱峰面积根标准曲线测液中组分浓度行测定次数少两次样品中测组分响应值应标准曲线线性响应范围超出标准曲线线性范围应甲醇（311）稀释进行分析
6 结果计算
结果式（1）计算：
…………………………………………（1）
式中：
X—试样中某种组分含量单位微克千克（μgkg）
c—标准曲线出样液中某种组分浓度单位纳克毫升（μgL）
co——标准曲线计算程空白样品中某种组分浓度单位微克升（μgL）
V—试样溶液定容体积单位毫升（mL）
m—试样称取质量单位克（g）
f—稀释子
计算结果重复性条件获两次独立测定结果算术均值表示结果保留三位效数字
7 精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算术均值20
8检出限定量限
称样量1 g定容体积1 mL时方法中辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A检出限均10μgkg定量限均20μgkg
9
91实验中器具均玻璃材质液相色谱串联质谱仪线均锈钢聚四氟乙烯材质
92 严格控制试剂空白空白值应检测结果产生明显影响否扣空白时会引起较误差
附录A
辛基酚等5种酚类物质相关信息
表A1 辛基酚等5种酚类物质英文名称中文名称分子式CAS号相分子质量
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
1
辛基酚
4tertOctyl phenol
140669
C14H22O
20633
2
正辛基酚
4nOctyl phenol
1806264
C14H22O
20633
3
壬基酚
Nonylphenol
25154523
C15H24O
22035
4
正壬基酚
4nNonylphenol
104405
C15H24O
22035
5
双酚A
Bisphenol A
80057
C15H16O2
22829
6
辛基酚13C6
4tertOctylphenol13C6
1173020240
C14H22O
21228
7
正辛基酚D17
4nOctyl phenolD17
1219794554
CD3(CD2)7C6H4OH
22343
8
壬基酚13C6
363Nonylphenol13C6
1173020386
C15H24O
22640
9
正壬基酚D4
4nNonylphenol 2356D4OD
358730957
C15H19D5O
22538
10
双酚AD4
Bisphenol A 33’55’D4
347841412
C15H12 D4O2
23231
附录B
超高效液相三重四极杆串联质谱参考条件
质谱参考条件
a）电离方式：电喷雾负离子模式
b）检测方式：反应监测（MRM）
c）离子源温度(TEM)650℃
d）雾化气(Gas1) 55
e）辅助气(Gas2) 65
f）气帘气(Gurtain Gas) 20
g）电喷雾电压：4500V
h）干燥气流速：11 Lmin
i）定性离子定量离子碎裂电压碰撞量见表B1
表B1 化合物定性定量离子质谱分析参数
化合物
Q1
Q3
DPV
CEV
辛基酚
205
133*
80
28
205
117
80
80
正辛基酚
205
106*
80
28
205
119
80
54
4壬基酚
219
133*
80
40
219
147
80
40
4正壬基酚
219
106*
80
30
219
119
80
45
双酚A
227
212*
80
25
227
133
80
35
辛基酚13C6
211
139*
73
32
正辛基酚D17
222
108*
80
28
壬基酚13C6
2251
1389*
90
38
正壬基酚D4
223
110*
80
28
双酚AD4
231
216*
80
28
* 定量离子
附录C
超高效液相三重四极杆串联质谱标准品色谱图
双酚A
双酚AD4
B2
B1
壬基酚13C6
4壬基酚
B4
B3
4正壬基酚
壬基酚D4
B6
B5
辛基酚13C6
4辛基酚
B8
B7
4正辛基酚
辛基酚D17
B10
B9
001 μgmL混合标准溶液中化合物MRM色谱图
图C1 双酚A图C2 双酚AD4图C壬基酚图C4壬基酚13C6图C5正壬基酚图C6 正壬基酚D4图C7辛基酚图C8 辛基酚13C6图C9正辛基酚图C10 正辛基酚D17
方法负责起草单位：中国食品药品检定研究院
方法验证单位：北京市疾病预防控制中心国家食品安全风险评估中心陕西省食品药品监督检验研究院中国肉类食品综合研究中心辽宁省食品检验检测院湖北省食品质量安全监督检验研究院
方法起草：宁霄金绍明邵兵黄传峰曹进丁宏张烁
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食品中辛基酚等5种酚类物质测定
BJS 201913
1 范围
标准规定食品中辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A液相色谱串联质谱测定方法
标准适婴配方食品畜肉禽蛋水产品罐头食品植物油中辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A测定
2原理
试样中加入位素标乙腈提取离心取清液固相萃取柱净化采液相色谱串联质谱仪测定标法定量
3试剂材料
行规定外实验试剂均分析纯水GBT 6682规定级水
31 试剂
311 甲醇（CH3OH）：质谱级
312 乙腈（CH3CN）：质谱级
313 氨水（NH4OH）：色谱级
32 试剂配制
005 氨水溶液（VV）：取氨水（313）05mL水稀释1000 mL
33 标准品
辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A标准物质辛基酚13C6正辛基酚D17壬基酚13C
6正壬基酚D4双酚A D4位素标中文名称英文名称CAS登录号分子式相分子量见附录A表A1纯度≥98
34 标准溶液配制
341标准储备溶液（100 mgL）：分称取辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A标准物质（33）10 mg（精确0000 1 g）甲醇（311）溶解转移100 mL容量瓶中定容刻度标准储备液浓度100 mgL溶液转移试剂瓶中贮存20 ℃冰箱中效期12月
342混合标准中间溶液（1 mgL）：分准确吸取辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A标准储备液(100 mgL)(341) 1 mL100mL容量瓶中 甲醇定容刻度摇匀制成1 mgL混合标准中间溶液溶液转移试剂瓶中置4 ℃冰箱中保存效期3月
343位素标标准储备溶液（100 mgL）：分称取辛基酚13C6正辛基酚D17壬基酚13C6正壬基酚D4双酚A D4位素标（33）10 mg（精确0000 1 g）甲醇（311）溶解转移100 mL容量瓶中定容刻度标准储备液浓度100 mgL溶液转移试剂瓶中贮存20 ℃冰箱中效期12月
344位素标混合标准中间溶液（1 mgL）：分准确吸取辛基酚13C6正辛基酚D17壬基酚13C6正壬基酚D4双酚A D4位素标标准储备液(100 mgL)(343)1 mL100 mL容量瓶中甲醇定容刻度摇匀制成1 mgL混合标准中间溶液溶液转移试剂瓶中置4 ℃冰箱中保存效期3月
345 位素标混合标准工作液（100 μgL）：分准确吸取位素标标准储备液(1 mgL)(344)1 mL10mL容量瓶中 甲醇定容刻度摇匀制成100 μg L混合标准工作液时配制
346混合标准工作溶液：分准确吸取混合标准中间液 (1 mgL)(342)适量加入位素标混合标准中间溶液（1 mgL）(344)辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A浓度分05 μgL1 μgL5 μgL10 μgL20 μgL50 μgL混合标准系列工作溶液时配制
35 材料
固相萃取柱（官化聚苯乙烯二乙烯苯萃取柱）：200 mg6 mL
4 仪器设备
41高效液相色谱串联质谱仪配电喷雾（ESI）离子源
42天：感量分0001g0000 1 g
43涡旋混合器
44 离心机：转速≥8000 rmin
45 超声波清洗器
5 分析步骤
51 试样制备
511 乳粉米粉：试样混合均匀密封标明标记20℃冰箱冷藏保存
512 禽蛋：取代表性试样约200 g壳组织匀浆机搅拌均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
513水产品畜肉：取代表性试样约200 g匀浆机匀浆均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
514 植物油：试样混合均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
515 罐头食品：取罐头中固形物试样约50 g 匀浆机匀浆均匀装入洁净容器中密封标明标记20 ℃冰箱中冷藏保存
冷藏保存样品解冻需次匀浆机均质
52 提取
准确称取1 g（精确0001 g）样品15 mL具塞玻璃试中加入01mL位素标混合标准工作液（100 μgL）(345) 5 mL乙腈（312）涡旋混匀超声提取15 min8000 rmin离心5 min取层乙腈相残留部分5 mL 乙腈重复提取次合乙腈相置冰箱20℃冷冻2h取出8000 rmin离心5 min取清液净化
53 净化
取固相萃取柱（35）前18 mL甲醇活化6mL水衡52项清液加30 mL水稀释充分摇匀1 mLmin~2 mLmin 速度样弃滤液12 mL60 甲醇水溶液（VV）淋洗弃淋洗液6 mL乙腈洗脱洗脱液50℃氮气吹干1 mL甲醇溶解残渣测
54 空白试验
加样品外采相分析步骤进行操作
55仪器参考条件
551色谱条件
a) 分析柱： C18 柱（3 μm50 mm × 3 mm）性相者捕集柱： C18 柱（5 μm50 mm × 46 mm）性相者捕集柱位进样阀前
b）流动相：A005氨水溶液（32）B甲醇（311）洗脱梯度见表1
c）流速：400 μLmin
d) 柱温：30℃
e) 进样量：10 μL
表1 梯度洗脱程序表
时间（min）
A()
B()
0
70
30
9
5
95
145
5
95
1451
70
30
18
70
30
552 质谱条件
a) 离子源：电喷雾离子源（ESI源）
b) 检测方式：反应离子监测（MRM）
c) 碰撞气高纯氮气干燥气雾化气鞘气等均氮气合适气体前应调节相应参数质谱灵敏度达检测求毛细电压干燥气温度鞘气温度鞘气流量喷嘴电压碰撞量碎裂电压等参数应优化佳灵敏度监测离子定量离子等信息详见附录B
56 定性测定
超高效液相色谱三重四极杆串联质谱条件测定试样标准工作溶液记录试样标准溶液中化合物色谱保留时间试样中检出某标准品色谱峰保留时间致色谱峰（变化范围±25）试样色谱图中选择监测离子相丰度相浓度标准溶液离子相丰度（k）偏差超表2规定范围确定试样中检出相应化合物
表2 定性确证时相离子丰度允许偏差
相离子丰度（）
k＞50
50≥k＞20
20≥k＞10
k≤10
允许偏差（）
± 20
± 25
± 30
± 50
57定量测定
571标准曲线制作
混合标准工作溶液（346）分仪器参考条件（55）进行测定目标化合物峰面积标峰面积值根标准曲线测液中目标化合物浓度
品色谱图参见附录C
572试样溶液测定
试样溶液（53）仪器参考条件（55）进行测定相应样品溶液色谱峰面积根标准曲线测液中组分浓度行测定次数少两次样品中测组分响应值应标准曲线线性响应范围超出标准曲线线性范围应甲醇（311）稀释进行分析
6 结果计算
结果式（1）计算：
…………………………………………（1）
式中：
X—试样中某种组分含量单位微克千克（μgkg）
c—标准曲线出样液中某种组分浓度单位纳克毫升（μgL）
co——标准曲线计算程空白样品中某种组分浓度单位微克升（μgL）
V—试样溶液定容体积单位毫升（mL）
m—试样称取质量单位克（g）
f—稀释子
计算结果重复性条件获两次独立测定结果算术均值表示结果保留三位效数字
7 精密度
重复性条件获两次独立测定结果绝差值超算术均值20
8检出限定量限
称样量1 g定容体积1 mL时方法中辛基酚正辛基酚壬基酚正壬基酚双酚A检出限均10μgkg定量限均20μgkg
9
91实验中器具均玻璃材质液相色谱串联质谱仪线均锈钢聚四氟乙烯材质
92 严格控制试剂空白空白值应检测结果产生明显影响否扣空白时会引起较误差
附录A
辛基酚等5种酚类物质相关信息
表A1 辛基酚等5种酚类物质英文名称中文名称分子式CAS号相分子质量
序号
中文名称
英文名称
CAS登录号
分子式
相分子量
1
辛基酚
4tertOctyl phenol
140669
C14H22O
20633
2
正辛基酚
4nOctyl phenol
1806264
C14H22O
20633
3
壬基酚
Nonylphenol
25154523
C15H24O
22035
4
正壬基酚
4nNonylphenol
104405
C15H24O
22035
5
双酚A
Bisphenol A
80057
C15H16O2
22829
6
辛基酚13C6
4tertOctylphenol13C6
1173020240
C14H22O
21228
7
正辛基酚D17
4nOctyl phenolD17
1219794554
CD3(CD2)7C6H4OH
22343
8
壬基酚13C6
363Nonylphenol13C6
1173020386
C15H24O
22640
9
正壬基酚D4
4nNonylphenol 2356D4OD
358730957
C15H19D5O
22538
10
双酚AD4
Bisphenol A 33’55’D4
347841412
C15H12 D4O2
23231
附录B
超高效液相三重四极杆串联质谱参考条件
质谱参考条件
a）电离方式：电喷雾负离子模式
b）检测方式：反应监测（MRM）
c）离子源温度(TEM)650℃
d）雾化气(Gas1) 55
e）辅助气(Gas2) 65
f）气帘气(Gurtain Gas) 20
g）电喷雾电压：4500V
h）干燥气流速：11 Lmin
i）定性离子定量离子碎裂电压碰撞量见表B1
表B1 化合物定性定量离子质谱分析参数
化合物
Q1
Q3
DPV
CEV
辛基酚
205
133*
80
28
205
117
80
80
正辛基酚
205
106*
80
28
205
119
80
54
4壬基酚
219
133*
80
40
219
147
80
40
4正壬基酚
219
106*
80
30
219
119
80
45
双酚A
227
212*
80
25
227
133
80
35
辛基酚13C6
211
139*
73
32
正辛基酚D17
222
108*
80
28
壬基酚13C6
2251
1389*
90
38
正壬基酚D4
223
110*
80
28
双酚AD4
231
216*
80
28
* 定量离子
附录C
超高效液相三重四极杆串联质谱标准品色谱图
双酚A
双酚AD4
B2
B1
壬基酚13C6
4壬基酚
B4
B3
4正壬基酚
壬基酚D4
B6
B5
辛基酚13C6
4辛基酚
B8
B7
4正辛基酚
辛基酚D17
B10
B9
001 μgmL混合标准溶液中化合物MRM色谱图
图C1 双酚A图C2 双酚AD4图C壬基酚图C4壬基酚13C6图C5正壬基酚图C6 正壬基酚D4图C7辛基酚图C8 辛基酚13C6图C9正辛基酚图C10 正辛基酚D17
方法负责起草单位：中国食品药品检定研究院
方法验证单位：北京市疾病预防控制中心国家食品安全风险评估中心陕西省食品药品监督检验研究院中国肉类食品综合研究中心辽宁省食品检验检测院湖北省食品质量安全监督检验研究院
方法起草：宁霄金绍明邵兵黄传峰曹进丁宏张烁
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